Resume
Samenvatting HT 9 display technieken - Farmaceutische biotechnologie (K0B04A)
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Dit is een samenvatting van ht 9 faag-en gistdisplay met extra uitleg, figuren en notities
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonnerAperçu du contenu
HOOFDSTUK 9: DISPLAY TECHNIEKENIntroductie:
Display technieken:
= Tot expressie brengen v eiwitten of peptiden op de celwand/-membraan ve organisme (‘to display’)
- Doel (meestal): die organismen selecteren die binden aan gewenste target
o Deze organismen ‘displayen’ een eiwit dat bindt aan gewenste target
o Bevatten ook coderende DNA
o DNA kan geamplificeerd worden en seq bepaald eiwitseq = gekend
- Eiwitten = vaak antilichamen of antilichaam fragmenten (halve blauwe maantjes)
- Principe:
o Antilichamen/fragmentjes op bacteriën of gisten tot expressie brengen
o Je wil weten: bindt eiwit (antilichaam) aan antigen (eiwit v interesse)
o Antigen linken aan bv magnetische beads
o Via magneet: scheiden v organismen die wel of nt gebonden zijn aan eiwit v
interesse
o Organisme opgroeien cel delen en delen DNA sequencen
o Obv DNAseq weten welk eiwit op mantel zat
Faagdisplay:
Faagdisplay:
- Meest gebruikte display techniek
- Alternatieven: gist display, zoogdierceldisplay, ribosomal display, …
- Bacteriofagen:
= virussen met bacteriële gastheren
o Knn bacteriën infecteren
o Onschadelijk voor hogere organismen zoals gist & zoogdieren
o Meest voorkomende organisme op planeet
o Overal waar bacteriën leven zijn fagen
o Lytische (bv. T7) en nt-lytische fagen (bv. M13)
Nt lytische: knn infecteren maar bacterie gaat er zelf nt van dood
Faagdisplay – M13:
- Nt-lytische fagen
- Opbouw faagpartikel:
o 5 structurele eiwitten
pIII, pVI, pVII, pVIII en pIX
pVIII: heel veel kopijen, pIII heeft er 5
o Binnenin stukje DNA
, - Filamenteuze faag:
o Staafvormig, circulair ssDNA, 10 genen
o Grootte genoom: 6400 bp
o Diameter: 7nm / lengte 700 tot 2000 nm, heel lang
- Levenscyclus M13 faag:
o M13 fagen infecteren bacterie
pIII eiwit v faag bindt aan f-pilus bacterie
o Genoom geïnjecteerd in bacterie (opgenomen in bacterie)
ssDNA komt vrij
Bacterie: ssDNA dsDNA (via bacterieel DNApol)
o Amplificatie faag genoom (bacterieel DNApol, zoals plasmide)
o Faag genoom codeert voor benodigde faag eiwitten (bacterieel RNA pol)
overgeschreven
o Nieuwe faagpartikels geassembleerd (mbv faag eiwitten)
o Uit cel getransporteerd, zonder lysis v bacterie (nt lytische)
- Faag opp bestaat uit eiwitten, meestal: (afh v wat we willen doen)
o Kandidaat peptiden gefusioneerd aan pVIII
pVIII: ~2000 kopijen/faag
Sterische hinder igv grotere eiwitten
o Kandidaat eiwitten (antilichamen) gefusioneerd aan pIII
pIII: tot 5 kopijen/faag
Faag nt heel groot, geen groot antilichaam binden koppelen aan pIII
- Eiwitten tentoon gesteld (‘display’)
- Fusie:
o Zorgen dat seq die coderen voor eiw in genoom v faag zit
o Genetisch, via klassieke kloneringstechnieken (i.e.restrictie
digest/ligatie)
Eiwit v interesse in dsDNA plakken
o Kan doordat ssDNA dsDNA tijdens bacteriële infectie
- In praktijk nt gewerkt met volledige faag genoom, maar met faagmide
o Nt perse nood om continu nieuwe faagpartikels te bekomen
- Faagmide:
o Plasmide waarop delen faag genoom aanwezig zijn
o Nt volledige genoom geen faagvorming bij bacteriële transformatie
o Minimaal nodig:
Bacteriële ORI: voor replicatie dsDNA na transformatie
Faag ORI: dsDNA ssDNA
Om DNA in te knn bouwen in faagpartikel
Resistentiegen
Expressiecassette:
Promoter
Signaal peptide
Multiple cloning site (MCS): bib aan eiwitten of peptide in te
kloneren
Deel faag manteleiwit (pIII of pVIII)
!!! Eiwitten in zelfde leesraam als signaal peptide en pIII gen
o Oorsprong bibliotheken:
Natuurlijke:
bv. antilichaam seq
Synthetische:
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur farmaciestudent1. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,08. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
73647 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans